涂布平板法操作步骤（倒平板、划平板、涂布实验操作）

灭菌准备

# 提前1个小时打开无菌室紫外灯消毒灭菌；

# 操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；

# 将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌；

# 所有无菌操作都需在酒精灯旁操作。

培养基配制

#1 LB肉汤：肉汤粉330g、5g葡萄糖、1000mL蒸馏水;

#2 营养琼脂培养基：琼脂培养基粉300g、5g葡萄糖、1000mL蒸馏水。

倒平板操作

将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰

用左手将培养皿打开-条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20ml)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，轻轻摇匀。

等待平板冷却凝固(大约需5~10min) 后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。

平板划线操作

将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；

在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞;

将试管口通过火焰;将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液;将试管口通过火焰，并塞上棉塞;

左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。

灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三区域内划线。注意不要将最后一区域的划线与第一区相连。

将平板倒置，放入培养箱中培养。

稀释操作

将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按10~10的6次方(打不出六次方来)的顺序编号。

用移液管吸取1ml培养的菌液，注入10倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。

从10倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。依次类推，直达完成最后一支试管的稀释。注:移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰的1~2cm处。

左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。

涂布平板操作

将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中;

取少量菌液(不超过0.1ml)，滴加到培养基表面;

将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s;

用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。